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文庫定量試劑盒
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NGSquant? Library qPCR kit for Illumina?
貨號 產(chǎn)品 規(guī)格 形式 說明書

產(chǎn)品信息

相關(guān)產(chǎn)品

NGSquant? Library qPCR kit for Illumina?

適用于Illumina 二代測序平臺的文庫定量試劑盒

NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?是一種基于 qPCR 方法對 Illumina 平臺測序文庫進行 DNA 分子數(shù)絕對定量分析的試劑盒。它可以對兩端含有 Illumina P5、P7 芯片序列的各種類型 DNA 片段文庫進行高特異性的快速定量,檢測結(jié)果靈敏度高,準確度高,重復(fù)性好,適用于大多數(shù)qPCR儀器。


產(chǎn)品優(yōu)勢

    靈敏度高 —能檢出低至 0.0002 pM 的文庫樣品;

    特異性強 —使用抗體修飾法熱啟動 DNA 聚合酶,避免了 PCR 擴增前的非特異性結(jié)合;文庫定量引物采用特殊算法設(shè)計,不會形成引物二聚體;

    擴增范圍廣—能檢測平均片段長度 1 kb 以內(nèi)的文庫;

    擴增效率高(E>0.92),實驗重復(fù)性好(R2 >0.99)。


本試劑盒包含以下四種成分:

1. 文庫DNA定量標(biāo)準品(qPCR DNA standard for Illumina):經(jīng)過梯度稀釋的六份十倍比梯度稀釋的雙鏈DNA片段溶液(20 pM-0.0002 pM),經(jīng)過絕對定量和嚴格質(zhì)控,用于標(biāo)準曲線制作;

2. 文庫定量引物(qPCR primer Mix for Illumina):含有 Illumina P5,P7 芯片序列并經(jīng)過優(yōu)化設(shè)計的一對qPCR引物;

3. 2×qPCR預(yù)混液(2×qPCR Mix for Illumina?):含有性能優(yōu)化的抗體修飾法DNA聚合酶、qPCR反應(yīng)緩沖液和SYBR Green染料等qPCR反應(yīng)所需成分;

4. ROX參比染料(ROX Reference Dye)。


   

圖1. DNA標(biāo)準品擴增曲線與熔解曲線。使用NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?檢測6個10倍梯度稀釋的文庫DNA定量標(biāo)準品,每個標(biāo)準品平行重復(fù)2次。結(jié)果顯示,試劑盒具有靈敏度高、特異性強、重復(fù)性好的特性。


圖2. 擴增產(chǎn)物電泳圖。使用NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?擴增文庫DNA標(biāo)準品得到的qPCR產(chǎn)物,電泳分析無非特異擴增現(xiàn)象。


圖3.兩款試劑盒中標(biāo)準品的對比。將GeneCopoeia的NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?和KAPA Library Quantification Kits for Illumina platforms的標(biāo)準品用BlazeTaq NGS qMix在ABI ViiA 7進行擴增。 兩套標(biāo)準品擬合出的標(biāo)準曲線基本重合,對應(yīng)濃度的標(biāo)準品的△Ct<0.3。


圖4:文庫擴增效率: 對不同類型的10種illumina文庫使用NGSquant? Library qPCR Kit for Illumina?分別檢測,每個文庫樣本進行6個梯度的10倍稀釋,計算出的擴增效率如上圖顯示,10個文庫的擴增效率均在90%-110%的范圍內(nèi),與擴增DNA標(biāo)準品的效率相近。



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